MS-级 Thermo Scientific Pierce 胰蛋白酶/Lys-C 蛋白酶混合物是一种胰蛋白酶和 LysC 的质谱 (MS) 级丝氨酸胞内蛋白酶混合物，与单独使用胰蛋白酶相比，可以同时酶切蛋白以实现更有效的酶切。

MS 级 Pierce 胰蛋白酶/Lys-C 蛋白酶混合物的特点包括：
•增强酶切 — 酶组合可减少胰蛋白酶缺失切割
•便利 — 胰蛋白酶和 LysC 蛋白酶以优化的比值提供，以组合使用形式进行酶切
•出色的选择性 — 胰蛋白酶具有 >95% 的 C 端赖氨酸和精氨酸特异性；LysC 具有 >90% 的 C 端赖氨酸切割特异性
•稳定 — 酶混合物以冻干形式提供

通过 MS 以高效、可重现的蛋白酶切开始进行蛋白表征、鉴别和定量。尽管胰蛋白酶通常用于蛋白酶切，但单独这一种蛋白酶并不足以完全酶切赖氨酸和精氨酸残基的羧基端的蛋白。因此，Lys-C 蛋白酶通常与胰蛋白酶共同作用，以连续酶切蛋白，缺失切割较少。Pierce 胰蛋白酶/Lys-C 蛋白酶混合物是胰蛋白酶和 LysC 蛋白酶的冻干混合物，已经过优化以提高蛋白酶切效率。它以 20 µg、5 x 20 µg 或 100 µg 灵活规格提供，也包括在 EasyPep Mini MS 样品制备试剂盒中。

此混合物中 MS 级胰蛋白酶源自猪胰腺提取物，经 TPCK 处理以消除糜蛋白酶活性并甲基化以改善酶切期间的稳定性。MS 级 Lys-C 蛋白酶是一种从产酶溶杆菌中高度纯化的天然酶。与胰蛋白酶不同，Lys-C 可以切割赖氨酸然后切割脯氨酸，是与其他蛋白酶配合使用实现较佳的蛋白酶切的理想选择。当作为混合物使用时，根据酶与蛋白比值，酶切可在短短 1.5–3 小时内完成或者过夜。在 -20°C 下储存时，该冻干酶混合物可保持稳定一年。

• 出色的选择性—胰蛋白酶具有 >95% 的 C 端赖氨酸和精氨酸特异性；LysC 具有 >90% 的 C 端赖氨酸切割特异性
• 高纯度—未检测到胰凝乳蛋白酶活性（胰蛋白酶）
• 完全酶切—胰蛋白酶/LysC 酶组合可减少胰蛋白酶缺失切割
• 增强稳定性—胰蛋白酶经过化学修饰可降低自溶活性
• 便利—酶以稳定的冻干或液体形式提供

胰蛋白酶是一种源自猪胰腺提取物的质谱 (MS) 级丝氨酸蛋白酶，特异性切割赖氨酸和精氨酸残基的羧基侧。该酶经过 TPCK 处理消除了糜蛋白酶活性，并通过甲基化进行化学修饰，得到高活性和更稳定的酶形式。胰蛋白酶可耐受常用的部分变性条件，如 0.1 SDS、1 M 尿素和 10% 乙腈。Pierce 胰蛋白酶在 pH 7-9 范围内活性较佳，在 pH < 4 条件下可逆失活。胰蛋白酶以 1 mg、5 包 20 µg 或 100 µg 的冻干粉和 100 µg 溶液的形式提供。

Lys-C 蛋白酶是从产酶溶杆菌中分离获得的质谱 (MS) 级丝氨酸蛋白酶。Lys-C 蛋白酶对赖氨酸残基具有较高的活性和特异性，与胰蛋白酶（即较少的肽段）相比，肽段较大，样品的复杂性较低。与胰蛋白酶不同，Lys-C 蛋白酶可以先切割赖氨酸然后切割脯氨酸，这使其适用于序列蛋白酶切，然后进行胰蛋白酶酶切，以减少切割缺失。这些独特的 Lys-C 蛋白酶特性可确保单独使用或随后进行胰蛋白酶酶切时的高酶切效率。此外，Lys-C 原型肽通常具有较高的电荷状态，使其成为 ETD 片段化的首选酶。

Lys-C 胰蛋白酶通常用于磷酸肽富集工作流程中，因为可在 N 和 C 端生成带有伯胺的肽，可利用胺反应性同量异位标签对片段进行双标记。这导致肽电离增强和定量限提高，因为在 MS3 采集期间可重新分离更多碎片离子。该酶可用于溶液内或胶内酶切工作流程，以产生用于 LC-MS/MS 蛋白鉴别的肽。

在 37°C 下可在 2 小时内完成高效蛋白酶切。在高度变性条件下（如 8 M 尿素、2 M 盐酸胍、1% SDS、2% CHAPS 和 40% 乙腈），Lys-C 蛋白酶可保持活性，并在 pH 7–9 条件下充分发挥作用（pH 8 下活性最大）。该冻干酶的质量为 30 kDa，在 –20°C 下储存时可保持稳定 1 年。该 Lys-C 酶以冻干形式（20 µg 或 100 µg含量）包装。

胰蛋白酶/Lys-C 蛋白酶混合物是胰蛋白酶和 LysC 蛋白酶的冻干混合物，已经过优化以提高蛋白酶切效率。尽管胰蛋白酶通常用于蛋白酶切，但单独这一种蛋白酶并不足以完全酶切赖氨酸和精氨酸残基的羧基端的蛋白。因此，Lys-C 蛋白酶通常与胰蛋白酶共同作用，以连续酶切蛋白，缺失切割较少。胰蛋白酶/Lys-C 蛋白酶混合物以 20 µg、5 x 20 µg 或 100 µg 灵活规格提供。根据酶与蛋白比值，酶切可在短短 1.5–3 小时内完成或者最长过夜完成。

胰凝乳蛋白酶、GluC、Asp-N 蛋白酶

• 增加序列覆盖范围—具有互补色谱、电离和片段化特性的重叠肽的蛋白表征结果较佳
• 高比活性—每种蛋白酶都具有极好的酶特异性
•稳定—以冻干形式提供

Asp-N 蛋白酶是一种 MS 级锌金属蛋白酶，来源于莓实假单胞菌的突变菌株，需要痕量锌来维持活性。Asp-N 蛋白酶主要在半胱氨酸氧化产生的天冬氨酸和半胱氨酸的氨基侧切割。也可能在谷氨酸残基切割；但是，谷氨酰基残基的切割率显著低于天冬氨酸残基的切割率。在 37°C 条件下，Asp-N 蛋白酶可在 2–20 小时内高效酶切蛋白，活性大于 20,000 单位/mg 蛋白，在变性条件（如 1 M 尿素、2 M 盐酸·胍、0.1% SDS、2% CHAPS 和 10% 乙腈）下仍可保持活性，在 pH 6–8 条件下具有较佳活性。该冻干酶的质量为 27 kDa，在 -20°C 下储存时可保持稳定 1 年。

Glu-C 蛋白酶也称为 V-8 蛋白酶，是从金黄色葡萄球菌中分离获得的 MS 级丝氨酸蛋白酶。Glu-C 蛋白酶特异性切割碳酸氢铵和醋酸铵缓冲液中谷氨酸残基的羧基侧，产生少量的肽片段。在磷酸盐缓冲液中也可能在谷氨酸和天冬氨酸残基切割。在 37°C 条件下，Glu-C 蛋白酶可在 5–18 小时内高效酶切蛋白，活性大于 500 单位/mg 蛋白，在变性条件（如 2 M 尿素、1 M 盐酸胍、0.1% SDS、2% CHAPS 和 20% 乙腈）下仍可保持活性。在 pH 8 条件下，Glu-C 蛋白酶活性较佳。该冻干酶的质量为 27 kDa，在 -20°C 下储存时可保持稳定 1 年。

胰凝乳蛋白酶是一种从牛胰腺中分离获得的 MS 级胞内蛋白酶，特异性切割酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和亮氨酸的羧基侧。在牛胰腺中发现两种主要形式的胰凝乳蛋白酶 A 和 B，其含量相等。它们是相似的蛋白质（80% 同源性），但具有不同的蛋白水解特征。Thermo Scientific 胰凝乳蛋白酶有两种形式的胰凝乳蛋白酶。由于胰蛋白酶可能与天然来源的胰凝乳蛋白酶共纯化，Thermo Scientific 胰凝乳蛋白酶经 TLCK 处理以消除可能的胰蛋白酶活性，提高酶切特异性。胰凝乳蛋白酶可以耐受温和的变性条件，如 0.1% SDS、2 M 尿素、2 M 盐酸·胍、1% CHAPS 和 30% 乙腈，在 pH 7.5–8.5 条件下具有较佳活性。该冻干酶的质量为 25 kDa，在 -20°C 下储存时可保持稳定 1 年。