抗体作为细胞生物学和生物化学中最重要的试剂之一，科学界每年在这类试剂上的花费约达20亿美元^[1]。但是我们经常会听到一些令人沮丧的结果---抗体不起作用，实验结果无法重复。

抗体的不可靠性给生物学研究（包括癌症，代谢，免疫学等）带来巨大的损失，尤其是流式实验过程，抗体的选择极其重要，可重复性差，特异性不足，批间差异性等均可导致错误结果和大量时间的浪费。但近年来，生物界对实验的可重复性越来越关注，传统抗体存在的问题凸显出来：

• 每使用一管新抗体都需要进行滴定测试，做不好还浪费抗体；

• 那么多种同型对照，是人是鼠傻傻分不清楚；

• 步骤复杂，一旦忘记加 Fc 阻断试剂，一切从头来过；

• 抗体不佳，阳性细胞群不明显，但样品珍贵，实验就地搁置；

• ……

2015年2月份，瑞士苏黎世大学（University of Zurich）蛋白质工程学家Andrew Bradbury，Andreas Plückthun和来自世界各地的110名研究人员在Nature上共同倡议：抗体的生产应该标准化^[2]。像基因一样，抗体也应由它们的序列来定义，并且应该在细胞系中重组而成，而非通过动物免疫得到，这样才能保证抗体的标准化及实验的可重复性。有科学家提出：使用重组抗体^[1]。


重组抗体不同于传统抗体，无需通过动物源性的样本制备，由改造后的抗体基因序列直接在哺乳动物细胞中表达，细胞培养均在标准化，无血清的环境中进行。抗体的生产均在遗传背景完全相同的细胞系中表达，极大避免了表达系统不同而带来的抗体批次间质量差异性。

美天旎 REAfinity^TM 重组抗体——为流式而生

什么是 REAfinity 抗体？
REAfinity 抗体是一种重组基因工程改造抗体，是将传统的小鼠或大鼠杂交瘤来源的单克隆抗体的抗原结合区（Fab）与经过突变的人 IgG1 的恒定区（Fc）进行基因重组而成。

为什么说 REAfinity抗体是为流式而生？

• 1）批次间稳定一致

REAfinity重组抗体源于一段只编码一种重链和轻链的DNA序列，从而确保抗体的超高纯度。标准化的培养条件下，由哺乳动物细胞表达，保证了抗体质量的批次间稳定性。
 

图2：对抗体进行质谱分析，数据表明：REAfinity抗体纯度非常高，而杂交瘤来源的抗体是一种混合物。(A)对两个杂交瘤来源的单克隆抗体样本进行质谱分析，可以看出，它们都含有一条分子量接近23,635Da的污染轻链。(B)两个REAfinity抗体样本的质谱分析结果显示，其含有极高纯度的轻链。
 

• 2）通用型同型对照

所有的REAfinity抗体都是人IgG1亚型；因此，对于超过1万种REA克隆号的所有抗体来说，只需一种人IgG1同型对照。根据抗原表达位置不同，该通用型同型对照抗体分为膜表面型和胞内型两类，无需花费时间寻找合适的同型对照抗体。
 

图3：使用REAfinity抗体时，只需一种通用型同型对照，降低了实验设计的复杂程度

• 3）无需Fc受体阻断

REAfinity抗体Fc段经基因突变改造，从而消除了抗体与Fcγ受体的非特异性结合。因此，在流式分析中，无需额外增加阻断步骤。
 

• 4）优选序列，染色指数高

挑选最佳克隆号的抗体，以该抗体序列作为改造的基础，所以REAfinity抗体亲和力更高、特异性更好；REAfinity抗体本身背景值低、抗体与荧光素结合的优良工艺，二者保证了抗体的高染色指数。

参考文献：
[1]Goodman SL. The antibody horror show: an introductory guide for the perplexed. N Biotechnol. 2018 Oct 25;45:9-13. doi: 10.1016/j.nbt.2018.01.006. Epub 2018 Feb 3. PMID: 29355666.
[2]Bradbury, A., Plückthun, A. Reproducibility: Standardize antibodies used in research. Nature 518, 27–29 (2015). https://doi.org/10.1038/518027a.